近遇到一個(gè)問(wèn)題：免疫沉淀后，抗體和Protein A/G beads 交聯(lián)劑是什么？
圖一：未結(jié)合抗體
圖二：抗體被共價(jià)結(jié)合到蛋白A，G上
為了將抗體共價(jià)耦聯(lián)到瓊脂固相化的Protein A或G上，這里DSS交聯(lián)劑就發(fā)揮作用了，它的特點(diǎn)有：
? 抗體非共價(jià)結(jié)合到蛋白 A/G Plus上
? DSS交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合抗體和蛋白A/G Plus
? 抗體不被洗脫下來(lái)
為此，科普了一下交聯(lián)劑相關(guān)的信息。
什么是交聯(lián)劑？
交聯(lián)劑是一類小分子化合物，分子量一般在200-600之間，具有2個(gè)或者更多的針對(duì)特殊基團(tuán)（氨基、巰基等）的反應(yīng)性末端，可以和2個(gè)或者更多的分子分別偶聯(lián)從而使這些分子結(jié)合在一起。在生命科學(xué)研究中，巧妙地運(yùn)用交聯(lián)劑可以使很多工作取得突破。
目前已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于：細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)研究，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究，蛋白質(zhì)間相互作用研究，生物daodan研究，載體蛋白與半抗原的連接，蛋白質(zhì)或其他分子的固相化，抗體的標(biāo)記，標(biāo)記轉(zhuǎn)移，蛋白質(zhì)與核酸的連接。
如何選擇交聯(lián)劑？
交聯(lián)劑的選擇基于它們的化學(xué)反應(yīng)性（例如：對(duì)于特定官能團(tuán)的專一性）以及其他與預(yù)期應(yīng)用相關(guān)的因素，包括：
? 化學(xué)特異性
? 間隔臂長(zhǎng)度
? 水溶性和細(xì)胞膜通透性
? 相同的或不同的反應(yīng)基團(tuán)（同雙功能與異雙功能比較）
? 自發(fā)反應(yīng)或光反應(yīng)性基團(tuán)
? 間隔臂是否可被剪切
? 包含可被放射性標(biāo)記或其他方式標(biāo)記的部分
活性交聯(lián)劑基團(tuán)與其官能團(tuán)靶點(diǎn)
反應(yīng)基團(tuán) | 官能團(tuán)靶點(diǎn) |
芳基疊氮化物（Aryl Azide） | 非選擇性（或伯胺） |
碳化二亞胺（Carbodiimide） | 胺/羧基（-NH2/-COOH） |
zhong氮甲烷（Diazirine） | 非選擇性 |
酰肼（Hydrazide） | 醛（-CHO）（氧化的碳水化合物） |
羥甲基膦（Hydroxymethyl Phosphine） | 胺（-NH2） |
亞胺酸酯（Imidoester） | 胺（-NH2） |
馬來(lái)酰亞胺（Maleimide） | 巰基（-SH） |
鹽乙酸酯（溴代或碘代） （Haloacetate（Bromo- or Iodo-）） | 巰基（-SH） |
N-羥基琥珀酰亞胺酯（NHS-ester） | 胺（-NH2） |
五氟代苯酯（PFP-ester） | 胺（-NH2） |
補(bǔ)骨脂素（Psoralen） | DNA和RNA |
吡啶基二硫化物（Pyridyl Disulfide） | 巰基（-SH） |
乙烯基砜（Vinyl Sulfone） | 巰基，胺，羥基 |
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